Роль биологического азота в азотном балансе почв

6. Образец почвы должен быть однородным (тщательно перемешанным). 

1.2.2. Определение влажности  почвы.

Необходимо  определить влажность почвы, так  как полученные данные анализа при  оценке результатов должны быть пересчитаны на 1г воздушно – сухой почвы. Для этого сначала взвешиваем пустой бюкс, затем помещаем в него 10-20г почвы и взвешиваем. После сушки в сушильном шкафу при 105º и достижения постоянной массы бюкс с навеской почвы снова взвешивают и определяют содержание воздушно – сухой почвы в 1 г сырой.

        Влажность (А) почвы лпределяют  по формуле:

                                 А%=

где   b – масса бюкса с сырой почвой (32,2 г)

         с – масса бюкса с сухой  почвой (30,1 г)

         а – масса пустого бюкса (19,6г) 
 

                                  А%= = 20% 

1.2.3.Учет  численности микроорганизмов  почвы.

      Для учета численности микроорганизмов  в почве применяют широко распространенный метод питательных пластин (метод Коха). Он позволяет учесть количество живых клеток в почве и выявить родовой и видовой состав, выделить чистые культуры бактерий. Но потребность в питательных веществах у различных микроорганизмов неодинакова, поэтому суспензию почвы высевают на разные среды (плотные и жидкие), предназначенные для различных физиологических групп микроорганизмов.

      При посеве почвенной суспензии на жидкие питательные среды методом предельного  разведения, численность микроорганизмов  бывает несколько занижена. 

      1.2.4.Приготовление почвенной суспензии и посев на питательные среды.

      Для проведения общего микробиологического  анализа почвы, необходимо сделать  посев микроорганизмов на плотные (МПА, КАА) и жидкие среды (среда Гильтая, среда Виноградского)

мясо  – пептонный агар (МПА) – учитывают количество сапрофитных микроорганизмов, использующие в качестве источника углерода органические соединения.

крахмало  – аммиачный агар (КАА) – выявляют микроорганизмы, способные использовать минеральные формы азота.

среда Гильтая – используют для выявления денитрифицирующих бактерий.

среда Виноградского  – применяется для определения анаэробных азотофиксаторов (Clostridium pasterianum).

      Также используют метод обрастания комочков для выявления численности определенных групп микроорганизмов:

— для  выявления аэробных целлюлозоразлагающих микроорганизмов раскладывание комочков производится на среде Гетченсона.

— для  выявления аэробных азотофиксаторов (в т.ч. Azotobacter) – на среде Эшби.

      Приготовление почвенной суспензии: 10г почвы помещают в колбу емкостью 250 мл с 90 мл стерильной водопроводной воды, интенсивно взбалтывают вращательным движением (не смачивая пробки) 10 мин. Затем методом разведения готовят суспензии, содержащие разное количество почвы: из предыдущего разведения стерильной пипеткой переносят 1 мл суспензии в пробирку, содержащую 9 мл воды. В первой пробирке 1 мл суспензии, приготовленной по этому методу, соответствует разведению 10^-1.

      Из  полученных разведений делают посев  на жидкие и плотные питательные  среды.

      Если  численность отдельных групп микроорганизмов в почве небольшая, их выявляют методом обрастания комочков почвы.

   
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 

2.Результаты  опыта. Учет численности  микроорганизмов  различных групп.

2.1. Учет количества  микроорганизмов  на плотных средах.

      Качественная  и количественная оценка

      микроорганизмов на МПА. 

      После инкубации чашки с засеянными средами вынимают из термостата и  в них подсчитывают число колоний, которые отражают число живых  клеток микроорганизмов в почве. 

 

      Число клеток в 1г воздушно – сухой почвы: 

      Х =  = 
 
 

 

      Качественная  и количественная оценка

      микроорганизмов на КАА. 

 

      Число клеток в 1г воздушно – сухой почвы:

       

      Х= -------------------------------- 
 
 

      Доминирующие  формы:

        
 
 
 
 
 
 
 
 
 

               МПА                                                                           КАА 

_________________________                                 _________________________

_________________________                                 _________________________

_________________________                                 _________________________

_________________________                                 _________________________ 
 

2.2. Учет количества  микроорганизмов  на жидких средах. 

      При определении численности микроорганизмов  на жидких средах пробирки ставят в  штатив и отмечают те из них, в которых  наблюдается развитие микроорганизмов  данной группы.

      При расчете в соответствии с требованиями необходимо составить числовую характеристику из трех цифр. Первая цифра соответствует числу параллельно засеянных пробирок (отмечается последнее разведение, в котором рост микроорганизмов наблюдается во всех параллельных пробирках). Следующие две цифры обозначают число пробирок, в которых отмечается развитие микроорганизмов в последующих двух разведениях.

      Среда Виноградского выделяет анаэробных азотофиксаторов. Рост наблюдается по изменению окраски с малиновой на желто – оранжевую, появлению мути и пузырьков воздуха.  

 
 

Обработка результатов по таблице Мак –  Креди:

 
 
 
 

                                                                           _________________________

                                                                               _________________________

       

        Среда Гильтая выделяет денитрификаторов. Рост наблюдается, т.к. появляются пузырьки и муть.                                                                          

 
 

Обработка результатов по таблице  Мак – Креди: 

 
 
 
 
 
 

                                                                           _________________________

                                                                               _________________________ 

2.3.Выявление  численности отдельных  групп микроорганизмов  методом обрастания  комочков.

      Для учета аэробных целлюлозоразлагающих микроорганизмов используют среду Гетченсона. О развитии колоний говорит обрастание комочков. 

 

      Среда Эшби используется для аэробных азотофиксаторов. Наличие таковых характеризуется появлением вокруг комочков слизи (блестящего налета). 
 

 
 
 

 
 
 
 
 
 
 
 
 

_________________________                                 _________________________

_________________________                                 _________________________

_________________________                                 _________________________

_________________________                                 _________________________