Конструирование иммунохроматографического теста для лейкоза крупного рогатого скота

Индивидуальный  учебный план

Практики

Общий план работы над магистерской диссертацией

    Актуальность  диссернационной  работы. Поголовье крупного рогатого скота (КРС) постоянно сокращается, и причиной этому множество факторов, одним из которых является болезни животных, приводящие к затратам связанных с потерей продукции, и на проведение профилактики и лечения. Среди таких болезней особое место занимает лейкоз – это связанно с трудностями в диагностике, особенностями течения заболевания, отсутствием эффективных средств профилактики и лечения.

    Лейкоз  крупного рогатого скота– хроническая инфекционная болезнь  опухолевой природы, основной причиной которой – злокачественное разрастание  клеток кроветворных органов с нарушением их созревания, в результате чего  происходи диффузная инфильтрация  органов этими клетками или появляются опухоли.

    Международный ветеринарный кодекс относит лейкоз крупного рогатого скота к болезням списка Б, которые имеют социально-экономическое  значение и представляют угрозу для  здоровья человека. По данным исследователей лейкоз распространен во всех областях Казахстана. Экономический ущерб складывается из недополучения продуктов животноводства, потери уникального генофонда в молочном скотоводстве, проибретения дорогостоящих зарубежных тест-систем для диагностики. Экономический ущерб,  нанесенный данной болезнью в хозяйствующем субъекте имени «40 лет Казхстана» Алматинской области по ценам 1995 года, составил 2837694 тенге, ущерб в расчете на одну корову составил 959 тенге. Подсчитано, что животные, инфецированные вирусом лейкоза, имеют молочную продуктивность на 12,7% и содержание жира в молоке на 0,09% ниже, чем здоровые животные.

    Лейкоз  крупного рогатого скота не считается  зооантропонозным заболеванием, однако проблема передачи вируса человеку и  гетерологичным видам животных еще  далека от своего разрешения. Особый интерес вызывает вопрос об опасности болезни для здоровья людей, потребляющих животноводческую продукцию и имеющих контакт с инфицированным или больным скотом. Правомерность этого вопроса оканчательно утвердилась, когда была доказана вирусная этиология заболевания, возможность преодоления вирусом лейкоза крупного рогатого скота и вируса Т-клеточного лейкоза человека. Не исключена вероятность рекомбинации между лейкозом крупного рогатого и вирусами человека, которая приведет к появлению онкогенной сущности, опасной для человека.

    На  основе вышеизложенного и так как еще не разработаны вакцины против лейкоза КРС и средств лечения, единственным эффективным методом борьбы с ним является совершенствование диагностических методов.

    Иммунохроматографический анализ является одной из последних разработок, отвечающих всем требованиям и наиболее широко используется в мире для получения одноразовых экспресс – тестов. Постановка теста максимально упрощена – требуется только внести исследуемый материал в соответствующую ячейку. Реакция протекает в один этап, так как иммунохроматографическая мембрана (в виде полоски) содержит антигены (или антитела) и соответствующий конъюгат для взаимодействия с исследуемым материалом. Результат анализа выявляется в виде окрашенных полос или пятен в областях контроля реакции и теста. Большинство быстрых тестов, основанных на иммунохроматографии, не требуют никаких дополнительных приспособлений и не нуждаются в холодильнике при хранении и транспортировке. Результаты теста готовы в течении 15 – 20 минут.  Для постановки реакции можно обойтись малым количеством исследуемого материала (достаточно одной капли).

    Целью нашей диссертационной работы является разработка быстрого по времени, несложного по проведению, доступного и не требующего дорогого оборудования и реагентов метод для диагностики лейкоза крупного рогатого скота, которым в данный момент является иммунохроматографический анализ.

    Исходя  из цели мы определили  задачи, которые  разделили на 2 учебных года. Задачи на первый учебный год:

• изучение литературы по вопросам диагностики лейкоза, в т.ч. с использованием ИХМ;
• ознакомление с научными работами, посвещенными проблемам диагностики инфекционных болезней на основе применения ИХА и других методов;
• освоение и сравнение основных методов диагностики лейкоза крупного рогатого скота, в том числе реакции иммуной деффузии, иммуноферментного анализа, полимеразной цепной реакции;
• изучение имеющихся диагностических тест-систем на основе иммунохроматографического анализа других инфекционных болезней: туберкулез, бруцелез, описторхоз.
• сравнение иммунохроматографических тест-систем с иммуноферментным анализом и полимеразной цепной реакцией для обнаружения туберкулеза, бруцелеза и описторхоза;
• обзор литературы по вопросам диагностики инфекционных болезней с использованием ИХА.

    Задачи  на второй учебный  год:

• анализ литературных данных по использованию ИХА при диагностике инфекционных болезней;
• определение возможных методов конструирования ИХА для диагностики лейкоза КРС;
• освоение методов имуннохроматографи;
• разработка метода ИХА для лейкоза КРС;
• разработка плана магистерской диссертации, описание результатов исследовании, выводов и предложении.

    Согласно  определенным задачам  и индивидуальному  плану были выполнены  следующие работы 

    По  индивидуальному  учебному плану было изучено 7 обязательных предметов и 7 предметов по выбору, общее количество их кредитов составляет 25. Сдала 14 экзаменов, из которых 4 предмета сдала на хорошо, и 10 на отлично.

    По  практике, прошла производственную практику в НЦБ РК, с 30.05.2011 по 09.07.2011. Прошла стажировку с 11.10.2011 по 21.10.2011 в Саратовском Государственном Аграрным университете имени Н.И.Вавилова. 

    По  общему плану работы над магистреской диссертацией были изучены литературы по вопросам лейкоза крупного рогатого скота, в т.ч. вирус лейкоза КРС, его структура, характеристика, историческая справка лейкоза КРС, развитие, течение и особенности лейкозного процесса, носители и факторы влияющие на развитие инфекционной болезни, распространяемость болезни на территории Казахстана и в мире, его социальная и экономическая значимость,  методы диагностики лейкоза, значимость охвата поголовья скота при диагностике лейкоза, профилактические меры против лейоза КРС. По вопросам диагностики лейкоза КРС были углебленно изучены методы на основе реакции иммунодифузии, иммуноферментного анализа, полимеразно-цепной реакции. Сопоставили их специфичность, чувствительность, эффективность, экономичность, простоту в использовании. Ознакомились с научными работами посвещенными проблемам диагностики инфекционных болезней на основе применения иммунохроматографических и других иммунных методов. Изучили иммунохроматографические тесты и другие методы для обнаружения бруцеллеза, туберкулеза, эхинококкоза, описторхоза.  Сделано сравнение методов иммуноферментного анализа и реакции иммунодиффузии с иммунохроматографическим анализом. Были выполнены обзоры литературы по вопросам диагностики инфекционных болезней,  в том числе лейкоза с использованием ИХА. Были определены возможные методы конструирования ИХА для диагностики лейкоза КРС.

    За  год обучения мною были освоены методы иммуноферментного анализа, иммунохроматографического  анализа, полимеразной цепной реакции, полимеразной цепной реакции в реальном времени. 
 
 
 
 
 

    Министерство  образования и  науки Республики Казахстан

    АО  «Казахский Агротехнический  университет им. С.Сейфуллина»

    Кафедра морфологии, микробиологии  и биотехнологии