Молекулярно-генетические методы исследования и их применение в медицине

• Продукт трансляции анализируют с помощью  электрофореза.
• Изменение электрофоретической подвижности белка свидетельствует о наличии мутации (нонсенс-мутация, нарушение сплайсинга РНК, сдвиг рамки считывания).

Косвенные методы выявления мутаций 
 

Косвенное выявление мутаций применяется  в тех 

случаях, когда:

• нуклеотидная последовательность гена еще неизвестна
• вместе с тем имеется информация об относительном положении гена на генетической карте.
• Фактически это соответствует диагностике с помощью метода сцепления генов

Косвенные методы выявления мутаций 
 

Технические приемы в косвенной диагностике  те же

самые, что  и в прямой диагностике:

• получение ДНК,
• рестрикция,
• электрофорез и т.д.
• добавляется математический анализ сцепления признаков

Основной  недостаток косвенных методов диагностики 

• Основной недостаток косвенных методов диагностики - обязательное предварительное изучение генотипа (гаплотипа) хотя бы одного пораженного родственника.
• В случае отсутствия пораженных родственников, доступных для обследования, проведение диагностики (за редким исключением) становиться невозможным.

Полиформизм длин рестриктных фрагментов (ПДРФ) для выявления мутаций 
 

• Использование косвенных подходов оказалось возможным благодаря существованию в геноме полиморфных локусов ДНК.
• Нуклеотидные замены достаточно часто встречаются в некодирующих участках ДНК.
• Значительное число нуклеотидных замен приводит к изменению картины рестрикции.

Полиформизм длин рестриктных фрагментов (ПДРФ) для выявления мутаций 
 

• Изменения можно выявить с помощью блот-гибридизации по Саузерну, поскольку изменяется длина рестриктных фрагментов.
• Эта разновидность полиморфизма ДНК получила название полиформизма по длине рестриктных фрагментов (ПДРФ).
• Расположенный вблизи изучаемого гена или внутри него полиморфный сайт может служить маркером аллельных вариантов этого гена, в том числе маркером патологических мутаций.